Посев на среду сабуро

  • 8 (495) 7-999-000
    8 (929) 568-14-20 Пн-Чт 9:00 – 18:00, Пт 9:00 – 17:00
    (время Московское)
  • Россия, 111672, Москва, ул. Салтыковская,
    дом 26, строение 1
  • Показать адрес на карте
  • Главная
  • Колонка Профессора
  • Статьи
  • Сравнительная оценка качества среды Сабуро отечественного и импортного производства

Сравнительная оценка качества среды Сабуро отечественного и импортного производства

Инфекция с участием грибов рода Candida spp. в настоящее время имеет устойчивый статус актуальной клинической проблемы. В последние годы грибы как возбудители болезней приобретают все больший удельный вес в структуре заболеваемости. Борьба с микозами, их ранняя диагностика и терапия требуют многосторонних знаний о мицелиальных и тканевых формах возбудителей, использования иммунологических методов исследований и целенаправленного эпидемиологического обследования с выявления факторов, определяющих динамику развития микотических поражений [1].

Основная масса грибов относится к условно патогенным микробам (УПМ). Являясь составной частью окружающей среды, некоторые свободно живущие виды грибов, контактируя с организмом в условиях сниженного иммунного статуса, колонизируют биотопы организма, вызывая развитие ГВЗ. Чаще всего микотические поражения человека вызывают дрожжеподобные грибы рода Candida: C. albicans, C. glabrata, C. parapsilosis, C. tropicalis, реже других видов. Возрастание случаев микозов среди населения связано с ухудшением экологических условий, нерациональным использованием антибиотиков, увеличением в популяции доли иммуноком- прометированных лиц. Дифференциацию дрожжеподобных возбудителей проводят по культуральным, морфологическим и тинкториальным, ферментативным и антигенным свойствам. Существуют тест-системы, облегчающие работу микробиологов по идентификации дрожжеподобных грибов, в тоже время необходимость изучения ферментативной и ассимиляционной способности грибов по стандартным методикам, остается актуальной. В ГНЦ ПМБ поставлена задача разработки среды для выделения грибов, содержащей в своем составе глюкозу, утилизируемую всеми грибами рода Candida.

Для выделения и количественного учёта C. albicans при санитарно-микологических исследованиях в среды добавляются антибиотики, 2% раствор теллурита калия, метабисульфит натрия или калия.

Белковой основой классического варианта среды Сабуро является пептон (мясной или казеиновый). В ГНЦ ПМБ белковой основой разрабатываемых сред является панкреатический гидролизат рыбной муки и панкреатический гидролизат казеина, обеспечивающие питательные потребности не только широкого круга бактерий, но и грибов.

Цель исследования

Изучение диагностической ценности (специфическая активность: чувствительность, скорость роста, стабильность основных биологических свойств микроорганизмов, дифференцирующие и ингибирующие свойства), питательной среды для выращивания и подсчёта числа дрожжевых и плесневых грибов № 2 ГРМ (Сабуро) в сравнительных испытаниях с коммерческими препаратами, выпускаемыми в соответствии с нормативной документацией и в период их срока годности.

А. П. Шепелин
ФБУН «Государственный научный центр прикладной микробиологии и биотехнологии» Роспотребнадзора, Московская обл., п. Оболенск

Проведена сравнительная оценка качества питательной среды Сабуро отечественного (ФГУН ГНЦ ПМБ) и импортного производства (Pronadisa, HiMedia). Отечественная среда Сабуро ГНЦ ПМБ намного дешевле импортных. Состав питательной среды № 2 ГРМ Сабуро обеспечивает чёткие морфологические признаки, являющиеся основой дифференциальной диагностики грибов рода Candida от других дрожжеподобных грибов, плесневых грибов и микробов-ассоциантов. Качество питательной среды Сабуро производства ГНЦ ПМБ не уступает импортным аналогам по всем параметрам, а по некоторым показателям превосходит их.

Материалы и методы

Материалами для исследования служили питательная среда № 2 ГРМ (Сабуро), питательные агары Сабуро различных фирм-производителей: Sabouraud Dextrose Agar (Pronadisa, Испания) и Sabouraud Dextrose Agar (HiMedia, Индия), в качестве ингибитора использовался 2% раствор теллурита калия.

Для определения специфической активности сравниваемых питательных сред использовались следующие музейные тест-штаммы микроорганизмов: Candida albicans, Aspergillus niger, Bacillus cereus, Staphylococcus aureus, Enterobacter cloacae, Enterobacter aerogenes, Escherichia coli, Enterococcus faecalis, Staphylococcus epidermidis, получены из ГИСК им. Л. А. Тарасе- вича, а также отдела коллекционных культур ФГУН ГНЦ ПМБ.

Взвеси тест-штаммов и микробов ассоциантов готовили в 0,9% растворе хлорида натрия в концентрации, соответствующей 10 единицам по стандартному образцу мутности бактериальных взвесей ГИСК им. Л. А. Тарасевича (ОСО 42-28-59-86П). Исходные взвеси доводили до нужных концентраций, используемых при исследованиях в соответствии с Инструкциями для каждого испытуемого и контрольного препаратов.

При работе использовали общепринятые физико-химические методы контроля, в том числе регламентируемые в соответствии с ТУ на питательные среды аналогичного назначения, в соответствии с МУК 4.2.2316-08 [3].

  1. Определение внешнего вида.
  2. Определение растворимости.
  3. Определение прозрачности и цветности раствора.
  4. Определение рН.
  5. Определение потери в массе при высушивании.
  6. Определение аминного азота.
  7. Определение хлоридов (в пересчёте на натрия хлорид).
  8. Определение прочности студня среды.
Читайте также:  Обработка педикулеза в приемном

Чувствительность, скорость роста, ингибирующие свойства изучали в соответствии с МУК 4.2.2316-08 [3], а также инструкциями по применению на коммерческие питательные среды, инструкцией по применению на питательную среду № 2 ГРМ (Сабуро). Качественное определение общего числа дрожжевых и плесневых грибов проводили по методике, изложенной в ГосФармокопеи XI [4].

Биохимические характеристики и стабильность сохранения основных биологических свойств микроорганизмов определяли с использованием тест-систем (системы индикаторные бумажные для идентификации микроорганизмов (СИБ), производства ФГУП НПО «Микроген» МЗ РФ, «ПБДЭ» – пластины биохимические, дифференцирующие энтеробактерии производства «НПО «Диагностические системы»»), а также биохимического анализатора «Multiscan as- sent» (Финляндия).

Производство питательной среды № 2 ГРМ (Сабуро) основано на применении гидролизата, имеющего низкий рН. Кислотность среды в значительной степени подавляет рост сопутствующей микрофлоры, но при этом не препятствует хорошему росту грибов рода Candida. Поскольку культуральный метод предполагает посев материала на плотные питательные среды с последующим выделением и идентификацией чистой культуры микроорганизма, для придания среде № 2 ГРМ (Сабуро) дополнительных селективных свойств, нами рекомендуется применение 2% раствора теллурита калия [4].

Результаты и обсуждение

На первом этапе исследований изучен компонентный состав ведущих зарубежных фирм (табл. 1), а также химические свойства разработанной питательной среды № 2 ГРМ (Сабуро) в сравнении с аналогами (табл. 2).

В качестве белковой основы для питательной среды № 2 ГРМ (Сабуро) используются ферментативные гидролизаты рыбной муки и казеина, производимые Научнопроизводственным отделом «Питательные среды» ГНЦ ПМБ, обеспечивающие хорошие ростовые свойства. Ведущие зарубежные фирмы, с этой же целью, применяются микологические пептоны.

Сравнительный анализ физико-химических характеристик показал, что питательные агары Сабуро различных фирм-производителей: Sabouraud Dextrose Agar (Pronadisa, Испания) и Sabouraud Dextrose Agar (HiMedia, Индия) по химическим характеристикам совпадают с питательной средой № 2 ГРМ (Сабуро), за исключением показателя по прочности геля. Уменьшение концентрации агара не повлияло на основные биологические показатели среды.

Приведённые данные являются средними значениями результатов, по меньшей мере, трёх измерений.

Таблица 1: Составы питательных агаров Сабуро различных производителей

HiMedia Pronadisa ГНЦ ПМБ
Sabouraud Dextrose Agar Среда № 2 ГРМ
Кат. № M063-500 G
Состав, г/л:

Микологический пептон – 10,0
Глюкоза – 40,0
Агар-агар – 15,0 pH 5,6±0,2

Кат. № 1064.00
Состав, г/л:

Dextrose – 40,0
Mixture of peptic digest of animal tissue and pancreatic digest of casein – 10,0
Bacteriological agar – 15,0 pH 5,6±0,2

ТУ 9398-002-78095326-2006 ФС 01012006/4121-06
Состав, г/л:

ПГРМ – 10,0 ПГК – 10,0
Дрожжевой экстракт – 2,0
Натрия фосфат однозамещенный – 2,0Глюкоза – 40,0
Агар микробиологический – 10,0±3,0 рН 6,0±0,3

Таблица 2: Физико-химические характеристики питательных агаров Сабуро различных фирм

Наименование сред рН Аминный азот, % Потеря в массе при высушивании, % Прочность, г (по Валенту)
HiMedia
Sabouraud Dextrose Agar 5,9 1,2 2,1 621
Merck
Sabouraud Dextrose Agar 5,65 1,0 4,2 681
ГНЦ ПМБ
Среда № 2 ГРМ с. 295 6,3 1,4 2,5 380

Следующим этапом исследований было сравнение чувствительности агаров Сабуро. Все питательные среды готовились по соответствующим методикам без ингибитора и с применением 2% раствора теллурита калия (5,0 мл на 1 л готовой среды). Чувствительность среды определяли по наибольшему разведению, обеспечивающему формирование колоний Candida spp. на всех засеянных чашках Петри. Для этого из приготовленных разведений (10-5, 10-6, 10-7) брали по 0,1 мл взвеси, содержащей соответственно 1000, 100 и 10 клеток и внесли в хорошо просушенные чашки Петри с агарами Сабуро. Инокулят тщательно распределяли по поверхности среды, используя стерильные шпатели, инкубировали при температуре (33±1)° С. Параллельно делали высевы на ГРМ-агар (для контроля роста). Учёт результатов проводили через 12, 18, 24, 48 ч инкубации с целью определения скорости роста.
Результаты представлены в табл. 3.

Таблица 3: Сравнительная характеристика питательных агаров Сабуро по биологическим показателям

Sabouraud Dextrose Agar
Тест-штаммы (разведение) HiMedia Pronadisa ГНЦ ПМБ
Без ингибитора С ингибитором Без ингибитора С ингибитором Без ингибитора С ингибитором
кол-во колоний, диаметр (мм), морфология
ns 5 8 «со* в о Й 38 2,5-3,0 гладкие, выпуклые белого цвета, с ровным краем 37 1,8-2,0 гладкие, выпуклые серого цвета с ровным краем 29 3,0-3,5 гладкие, выпуклые белого цвета, с ровным краем 24 1,4-1,6 гладкие, выпуклые серого цвета с ровным краем 38 3,5-4,0 гладкие, выпуклые белого цвета, с ровным краем 31 2,0-2,5 гладкие, выпуклые чёрного цвета с ровным краем
A. niger 1119 10 -3 Разветвленный, многоядерный мицелий чёрного цвета Разветвленный, многоядерный мицелий чёрного цвета Разветвленный, многоядерный мицелий чёрного цвета Разветвленный, многоядерный мицелий чёрного цвета Разветвленный, многоядерный мицелий чёрного цвета Разветвленный, многоядерный мицелий чёрного цвета
B. cereus 8035 10 -4 17 8,0-10,0 Матовые, кремового цвета, с неровным краем Нет роста Нет роста Нет роста 22 10,0-15,0 Шероховатые, кремового цвета, с неровным краем Нет роста
E. faecalis 775 10 -3 Сливной рост Нет роста Сливной рост Нет роста Сливной рост Нет роста
E. cloacae A-186 10-3 Слабый сливной рост Нет роста Сливной рост Нет роста Сливной рост Нет роста
-res 0 S. Слабый сливной рост Нет роста Слабый сливной рост Нет роста Сливной рост Нет роста
S. aureus 209-р 10 -3 Сливной рост Нет роста Нет роста Нет роста Сливной рост Нет роста
E. aerogenes 10006 10 -3 Слабый сливной рост Нет роста Сливной рост Нет роста Сливной рост Нет роста
E. coli ATCC 25922 10 -3 Сливнойрост Нет роста Сливной рост Нет роста Сливной рост Нет роста
Читайте также:  Опсоменорея мкб 10

Данные, представленные в табл. 3, получены через 48 ч инкубации, так как через 12 и 24 ч инкубации колонии на агарах Сабуро с теллуритом калия ещё недостаточно сформированы. Оптимальным временем инкубации следует считать 40-48ч ч при температуре (33±1)° С.

Далее определяли показатель ингибиции по отношению к микробам-ассоциантам B. ce- reus, S. aureus, E. cloacae, E. aerogenes, E. coli, E. faecalis, S. epidermidis. При определении показателя ингибиции посевная доза микробов-ассоциантов должна превышать посевную дозу патогенной микрофлоры более чем в 100 раз. Приготовлены взвеси тест-штаммов, содержащие 105, 106, м.к./мл. Для придания агарам Сабуро селективных свойств, в качестве ингибиторов использовали 2% раствора теллурита калия (5 мл на 1 л среды), антибиотики (циклогексимид 0,4 г/мл, пенициллин 20 ЕД, стрептомицин 40 мг/мл), метабисульфит натрия (2 г/л).

Добавление в среду ингибиторов подавляет рост всей сопутствующей микрофлоры. Рост тест-штаммов C.
A. niger на питательных агарах Сабуро имели типичную морфологию:

C. albicans — гладкие, выпуклые белого цвета, в виде полусферы с ровным краем. Aspergillus niger имели разветвлённый, многоядерный мицелий чёрного цвета. Колонии C. albicans в присутствии теллурита калия приобретают чёрную окраску.

Выводы

Анализируя результаты по определению чувствительности разрабатываемой среды и скорости роста можно сделать вывод о высокой чувствительности среды, так как на всех засеянных чашках при посеве тест-штаммов из разведений 10-5, 10-6, 10-7 грибы рода Candida вырастали в виде хорошо сформированных, более крупных, чем на коммерческих средах, колоний (рис.1).

Рис. 1. Рост колоний Candida spp. на среде Сабуро разных производителей.

Интенсивность окрашивания, характерная для Candida в присутствии теллурита калия, ярче выражена на питательной среде № 2 ГРМ (Сабуро), чем на Sabouraud Dextrose Agar (Pron- adisa) и Sabouraud Dextrose Agar (HiMedia) (рис. 2).

Состав питательной среды № 2 ГРМ (Сабуро) обеспечивает чёткие морфологические признаки, являющиеся основой дифференциальной диагностики грибов рода Candida от других дрожжеподобных грибов, плесневых грибов и микробов-ассоциантов.

Рис. 2. Рост колоний Candida spp. на среде Сабуро разных производителей в присутствии теллурита калия.

  1. Кашкин П. Н., Лисин В. В. Практическое руководство по медицинской микологии. – Л., 1983- – 192 с.
  2. Микробиологическая диагностика вульво-вагинального кандидоза. Метод. рекомендации / Карпунина Т. И., Олина А. А., Машуров М. Г. – Пермь, 2006. – 36 с.
  3. Методы контроля бактериологических питательных сред. Метод. указания МУК 4.2.2316-08. Утверждены Роспотребнадзором 18. 01. 2008.
  4. XI Государственная Фармакопея СССР /Вып. 2. – М.: 1990. – 496 с.

Питательная Среда №2 Сабуро, для выращивания грибов

Описание

Среда №2 Сабуро Оболенск — Цена за упаковку 0,25 кг

Состав среды:

панкреатический гидролизат рыбной муки, панкреатический гидролизат казеина, дрожжевой экстракт, натрия фосфат однозамещенный, глюкоза, агар.
В виде гомогенного сухого, легко растворимого порошка светло-желтого цвета, светочувствительный. Готовая среда светло-коричневого цвета с легкой опалесценцией.
Кислотность среды: при 25°С имеет рН 6,0 ± 0,3.

Форма выпуска:

сухой порошок в полиэтиленовых банках по 250 г.
Приготовленный агар пригоден не менее 10 суток при температуре хранения +2…8°C

Условия хранения:

в герметично закрытой упаковке в сухом защищенном от света месте при температуре +2…30°C.
Срок годности — 2 года с даты производства, указанной на упаковке.

Представляя собой питательную среду для выращивания грибов различной природы (дрожжевых, плесневых), среду Сабуро может различаться по своему составу и в зависимости от компонентов использоваться для самых разных целей. В практике выращивания ацидофильных бактерий, дрожжей и патогенных грибов среда Сабуро считается наиболее питательной средой, которая позволяет использовать их в лабораторных анализах и исследованиях.

Что такое среда Сабуро

Представляя собой искусственную среду для питания грибов, простейших и бактерий, среда Сабуро позволяет выращивать и подсчитывать число и исследовать качество выращиваемой среды для контроля микробной загрязненности при употреблении нестерильных лекарственных препаратов. Внешне данное средство представляет собой порошок с повышенной степенью гигроскопичности, имеющий светло-желтый оттенок.

Состав среда Сабуро иметь может следующий:

  • гидролизат рыбной муки;
  • гидролизат казеина панкреатический;
  • однозамещенный натрия фосфат;
  • дрожжевой экстракт;
  • агар;
  • глюкоза.
Читайте также:  Красные пятна по телу чешутся что это

Также могут при меняться такие разновидности данного типа среды, как пептонный агар Сабуро, где основным составляющим выступает пептон, среда Сабуро на дрожжевой воде, медовая среда Сабуро (здесь вместо глюкозы или мальтозы применяется натуральный мед), среда Сабуро, предназначенная для хранения выращенных культур.

Кому назначают исследование

Поскольку основным принципом работы данной среды является определение количества и скорости развития патогенной микрофлоры, когда вычисляется на основе полученных данных число грибов различной природы в среде, а также степень развития дрожжей и ацидофильных бактерий, применяться среда Сабуро может в следующих случаях:

  1. при наличии поражений кожи, которые могут иметь различный характер. С помощью среды Сабуро предоставляется возможность выделить наличие на коже штаммов бактерий и дрожжевых грибов, которые становятся причиной возникновения фурункулеза, кожной сыпи, воспалительных абсцессов;
  2. при проведении диагностирования особенностей среды на коже: увеличение активности дрожжевых грибов либо ацидофильных бактерий провоцирует частые отеки тканей, гиперемию, воспалительные процессы на коже;
  3. для определения наличия кандидоза;
  4. при выявлении парши, заболевания кожи, имеющего высокую степень активности и передающееся даже при небольшом контакте с зараженным человеком.

Основным преимуществом данной процедуры следует считать ее эффективность: даже при разовом проведении становится возможным выявить многие причины поражения кожных покровов, установить причины часто повторяющихся воспалительных процессов и абсцессов.

Зачем делать такой анализ

Назначается среда Сабуро при необходимости проведения комплексной диагностики при выявлении многих кожных заболеваний, которые вызываются активным размножением дрожжевых грибов, ацидофильных бактерий. Назначение процедуры делается врачом-дерматологом, и количество проводимых процедур также рассчитывается им. При необходимости уточнения диагноза может назначаться две и более диагностические процедуры среда Сабуро.

При неоднократном повторении данной исследовательской процедуры отрицательного воздействия на организм выявлено не было.

Виды процедуры

В зависимости от компонентов, которые применяются для проведения анализа, процедура может различаться. Наиболее часто применимыми считаются следующие ее разновидности:

  • среда Сабуро на дрожжевой воде;
  • медовая среда Сабуро;
  • пептонный агар.

Перечисленные виды имеют несколько измененный состав, однако эффективность проведения не изменяется и реакция используется для определения наличия повышенного количества дрожжевых грибов и бактерий ацидофильного типа.

О приготовлении среды Сабуро расскажет данное видео:

Показания для проведения

  • К основным показаниям следует отнести такие состояния, как различные поражения кожи, которые возникают чрезмерно часто и сопровождаются такими агрессивными проявлениями, как воспалительные процессы, абсцессы, глубокие фурункулы.
  • Изменения среди и микрофлоры кожи, покраснения и высыпания также становятся причиной назначения данной реакции для постановки точного диагноза.
  • Белая пьедра.

Противопоказания для проведения

Однако при повышенной чувствительности кожи к компонентам среды Сабуро проведение данной реакции не назначается. Используются другие методы, позволяющие диагностировать кожные заболевания и выбрать схему их лечения.

Детский возраст (до года) и беременность с противопоказаниями к проведению подобных исследований также следует считать противопоказаниями к осуществлению среды Сабуро.

Схема среды Сабуро

Безопасно ли исследование

В большей мере данная реакция для исследования микрофлоры кожи назначается при отсутствии повышенной чувствительности кожи, однако в большинстве случаев она безопасна для организма человека.

Про приготовления к проведению среды Сабуро читайте ниже.

Подготовка к процедуре

Чтобы результат проводимого анализа не был искажен, следует заблаговременно к ней подготовиться.

Сложностей в подготовке нет: накануне не рекомендуется принимать острую пищу, не употреблять алкоголь, перед процедурой при взятии образца кожи поверхность кожи полностью очищается. При приеме любых видов лекарств следует сообщить об этом лечащему врачу.

Как все проходит

Особых ощущений при исследовании микрофлоры кожи не возникает, поскольку для проведения анализа берется соскоб с кожи. Частички кожного покрова несут в себе все бактерии, которые выявляются при данной реакции.

Для выявления нарушений в составе микрофлоры, с поверхности кожи берется соскоб, который помещается в среду Сабуро. Далее проводится реакция, показывающая степень заселенности кожи определенными микроорганизмами (бактериями айидофильного происхождения, грибами).

Расшифровка результатов

Для назначения лечения следует получить точные данные реакции, и для этого требуются все знания лечащего врача с учетом всех факторов, являющихся специфическими для конкретого заболевания. По этой причине процесс расшифровки полученного анализа может проводиться только лечащим врачом-дерматологом.

О том, какова цена на питательную среду Сабуро в микробиологии, расскажем ниже.

Средняя стоимость процедуры

Цена данной процедуры зависит от места ее проведения, числа повторений процедуры и применяемого количества реактивов. Стоимость может колебаться от 1 280 до 1 970 рублей.

Еще больше полезной информации о методе Сабуро представлено в этом видео:

Добавить комментарий

Ваш e-mail не будет опубликован. Обязательные поля помечены *

Adblock detector